人類的大腦猶如一個(gè)小小的宇宙，包含了百億級(jí)神經(jīng)元和百萬(wàn)億級(jí)的神經(jīng)突觸，隱藏著世界上最美麗而又最深邃的奧秘。
所謂工欲善其事，必先利其器。為了能夠進(jìn)一步揭開(kāi)大腦的神秘面紗，全球科研人員都在致力于打造用于解析腦連接圖譜和功能動(dòng)態(tài)圖譜的研究工具：從隨機(jī)光學(xué)重建顯微鏡（STORM），到熒光光敏定位顯微鏡（FPALM），再到摘得2014年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的受激輻射損耗超高分辨率顯微鏡（STED）……探索從未止步。
近日，國(guó)際權(quán)威學(xué)術(shù)期刊《自然—生物技術(shù)》以在線形式全文發(fā)表了一項(xiàng)來(lái)自中國(guó)的最新研究成果：北京大學(xué)的陳良怡團(tuán)隊(duì)聯(lián)合華中科技大學(xué)譚山團(tuán)隊(duì)，研發(fā)出一種超靈敏的結(jié)構(gòu)光超高分辨率顯微鏡——海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡（Hessian SIM），從而將光學(xué)顯微鏡的性能再度提升到了一個(gè)新的高度。
超靈敏 高分辨
分辨率通常被認(rèn)作是光學(xué)顯微鏡的生命，而由我國(guó)科學(xué)家自主研發(fā)的海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡，堪稱將這一點(diǎn)做到了“極致”。
在每秒鐘得到188張超高分辨率圖像時(shí)，海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡的空間分辨率可達(dá)85納米，即能夠分辨單根頭發(fā)的1/600~1/800大小結(jié)構(gòu)，而其所需要的光照度卻小于常用的共聚焦顯微鏡光照度3個(gè)數(shù)量級(jí)。
同時(shí)，鑒于極低的光漂白以及光毒性，這款新型顯微鏡還實(shí)現(xiàn)了100Hz超高分辨率成像下，連續(xù)采樣10分鐘得到18萬(wàn)張超高分辨率圖像以及在1Hz超高分辨率成像下，連續(xù)1小時(shí)超高分辨率成像基本無(wú)光漂白。
也許通過(guò)對(duì)比更能清晰地展示海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡卓越的性能。與2014年摘得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)桂冠的STED顯微鏡相比，這款海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡憑借著極高的時(shí)間分辨率、極低的光毒性而在活細(xì)胞超高分辨率成像方面呈現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢(shì)。
舉例來(lái)說(shuō)，在觀察細(xì)胞內(nèi)囊泡與細(xì)胞質(zhì)膜融合釋放神經(jīng)遞質(zhì)和激素這一過(guò)程時(shí)，雖然海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡與STED顯微鏡均可以觀察到囊泡融合形成的孔道，但是前者在此基礎(chǔ)上，還進(jìn)一步解析出了囊泡融合時(shí)的4個(gè)不同中間態(tài)：包括囊泡打開(kāi)3納米小孔、囊泡塌陷、融合孔道維持以及最后的囊泡與細(xì)胞質(zhì)膜完全融合，可謂真正實(shí)現(xiàn)了膜孔道形成全過(guò)程的可視化。
“除此之外，應(yīng)用海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡我們還實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞‘能量工廠’線粒體的超快超分辨成像，首次在活細(xì)胞中解析了線粒體融合、分裂時(shí)內(nèi)嵴的活動(dòng)，以及線粒體內(nèi)嵴自身的重組裝過(guò)程，也能夠觀察活細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與線粒體發(fā)生相互作用時(shí)的動(dòng)態(tài)變化。”此項(xiàng)工作的通訊作者之一、北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所研究員陳良怡告訴《科學(xué)新聞》。
而實(shí)際上，此前在該領(lǐng)域內(nèi)，無(wú)論是STED還是STORM都無(wú)法做到這一點(diǎn)，由此更凸顯出超靈敏海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡在觀察光毒性敏感的細(xì)胞器如線粒體動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。
在研發(fā)團(tuán)隊(duì)看來(lái)，海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡誕生的意義，一方面在于其是對(duì)基于硬件自主設(shè)計(jì)的新偏振旋轉(zhuǎn)玻片陣列、高精度的時(shí)序控制程序以及高數(shù)值孔徑物鏡的應(yīng)用；另一方面則在于它創(chuàng)新的重構(gòu)算法，即借鑒了人眼區(qū)分信號(hào)和噪聲的機(jī)制，首次提出將“生物樣本在多維時(shí)空上連續(xù)、而噪聲是完全隨機(jī)分布”的先驗(yàn)知識(shí)用于構(gòu)建海森矩陣，指導(dǎo)超高分辨率熒光圖像的重建。
目前，超靈敏海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡是世界上活細(xì)胞成像時(shí)間最長(zhǎng)、時(shí)間分辨率最高的超高分辨率顯微鏡，適用于各種細(xì)胞、不同探針的熒光成像。
“可以說(shuō)，所有應(yīng)用掃描共聚焦顯微鏡的場(chǎng)景都可以使用海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡，因而其具有廣泛的應(yīng)用前景。”陳良怡介紹道。
屢創(chuàng)新 無(wú)止境
在海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡研發(fā)成員名單中，我們看到了一組熟悉的名字：陳良怡、黃小帥。而他們也正是榮登“2017年度中國(guó)科學(xué)十大進(jìn)展”的“新一代微型化雙光子熒光顯微鏡”的主創(chuàng)成員。
2013年底，國(guó)家重大科研儀器研制項(xiàng)目“超高時(shí)空分辨微型化雙光子在體顯微成像系統(tǒng)”正式啟動(dòng)，其旨在探索如何將下一代的激光、掃描、控制、成像新原理和圖像處理新方法等有機(jī)結(jié)合，應(yīng)用于在體熒光成像過(guò)程。
之后，北京大學(xué)程和平院士帶領(lǐng)一支包括生物成像技術(shù)專家陳良怡在內(nèi)的跨學(xué)科團(tuán)隊(duì)，整合了光學(xué)儀器研發(fā)、電路控制、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等各方面的力量，調(diào)集關(guān)鍵設(shè)備、確定時(shí)間節(jié)點(diǎn)，群策群力、夜以繼日地攻堅(jiān)作戰(zhàn)，耗時(shí)3年多并最終成功“突圍”。
新一代微型化雙光子熒光顯微鏡體積非常小，僅重2.2克，適于佩戴在小動(dòng)物頭部顱窗上，能夠?qū)崟r(shí)記錄數(shù)十個(gè)神經(jīng)元、上千個(gè)神經(jīng)突觸的動(dòng)態(tài)信號(hào)；而在大型動(dòng)物上，它還有望實(shí)現(xiàn)多探頭佩戴、多顱窗不同腦區(qū)的長(zhǎng)時(shí)程觀測(cè)。
給小鼠戴上這一顯微鏡后，研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)獲取了小鼠在覓食、打斗、嬉戲等自由行為中大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動(dòng)清晰、穩(wěn)定的圖像。“這是我們第一次觀察到自由活動(dòng)狀態(tài)下的小鼠是‘怎么想的’。”陳良怡介紹。
這一世界成像儀器領(lǐng)域的重大突破，可謂為腦與認(rèn)知科學(xué)、人工智能研究的推進(jìn)提供了重要工具。也正因如此，它一經(jīng)問(wèn)世，便迅速震驚了世界。
2014年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)得主Edvard I. Moser專門(mén)慕名前來(lái)，并用“革命性”來(lái)形容這一成果；成果在2016年底美國(guó)神經(jīng)科學(xué)年會(huì)、2017年5月冷泉港亞洲腦科學(xué)專題會(huì)議上報(bào)告后，更得到多位國(guó)內(nèi)外神經(jīng)科學(xué)家的高度贊譽(yù)。
無(wú)論是新一代微型化雙光子熒光顯微鏡，還是新晉的超靈敏海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡，這些在國(guó)家重大科研儀器研制上的一個(gè)個(gè)碩果，都彰顯出這支以年輕PI和碩博研究生為主體、具有學(xué)科交叉背景和核心技術(shù)創(chuàng)新能力的“中國(guó)智造”隊(duì)伍的強(qiáng)大實(shí)力與無(wú)限潛力。
對(duì)于陳良怡和他的團(tuán)隊(duì)而言，一切只是開(kāi)始，創(chuàng)新永無(wú)止境。“下一步，我們將繼續(xù)攻關(guān)，以期進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)微型化海森結(jié)構(gòu)光的顯微在體成像。”陳良怡表示�！�